產(chǎn)品概述：

產(chǎn)品貨號(hào)：MAG-MS-GDNA-50，MAG-MS-GDNA-250

產(chǎn)品規(guī)格：50 rxns、250 rxns

運(yùn)輸條件：常溫運(yùn)輸

保存條件：PK Soln 2-8℃保存12個(gè)月，-20℃長(zhǎng)期保存，其它組分室溫保存12個(gè)月。

應(yīng)用范圍：抗凝全血或血液白膜層、唾液、含保存液拭子、干拭子/棉簽、干血斑、動(dòng)物組織、培養(yǎng) 細(xì)胞、FFPE、指甲或頭發(fā)、革蘭氏陰性菌。

產(chǎn)品組分

*注：

1）若使用前Buffer ATL有沉淀，需在56℃下溫育溶解后使用；

2）Buffer DW2為濃縮溶液，使用前請(qǐng)按照瓶身標(biāo)簽提示加入無(wú)水乙醇進(jìn)行稀釋。

產(chǎn)品介紹

本制品適用于從多種類型樣本中提取DNA，如：全血或血液白膜層、唾液、含保存液拭子、干拭子/棉簽、干血斑、動(dòng)物組織、培養(yǎng)細(xì)胞、FFPE等樣本。試劑盒采用了磁性納米顆粒固相核酸富集技術(shù)，精選高性能納米磁珠，配合精心研制的Buffer體系組合而成。提取所得的DNA產(chǎn)物可直接用于PCR、qPCR、芯片分析、NGS等各種下游分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

適用儀器

適用于基于磁轉(zhuǎn)移技術(shù)的32位或96位核酸提取儀。如BIO-DL 32，TIANGEN TGuide S32，TIANLONG NP968-C，Rosetta 96等自動(dòng)化核酸提取儀，也適用于手動(dòng)提取。

操作步驟

一．首次使用前：

1.樣本前處理步驟，若使用水浴鍋進(jìn)行裂解，期間需將內(nèi)容物顛倒混勻2~3次；若使用恒溫振蕩器裂解，建議設(shè)置振蕩速度為1000~1500 rpm；

2. Buffer DW2使用前需按照試劑瓶標(biāo)簽提示加入無(wú)水乙醇進(jìn)行稀釋后使用；

3.建議使用Buffer DW1清洗2次，可改善所得DNA純度。

4.自備試劑：異丙醇（AR）、無(wú)水乙醇（AR）

二．樣本前處理

A.   抗凝全血或血液白膜層

1.   向2 mL離心管中加入25 μL PK Soln。

2.   加入250 μL抗凝全血樣本至上述離心管。

注：禽類抗凝血液，取10~15 μL并加入去離子水補(bǔ)足至250 μL，再進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。

3.   加入250 μL Buffer AL，高速渦旋10秒，于70℃振蕩溫浴15分鐘。短暫離心后 冷卻至室溫。

4.   向離心管中加入350 μL異丙醇和15 μL MB Mix，渦旋振蕩5~10分鐘。按【純化步驟】繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)操作。

B.   新鮮唾液、含保存液的唾液或含保存液拭子

1.   向2 mL離心管中加入25 μLPK Soln。

2.   加入300μL新鮮唾液樣本（或唾液/保存液混合液、充分渦旋的拭子/保存液混合液 樣本）至上述離心管。

3.   加入300μL Buffer AL，高速渦旋10秒，于70℃振蕩溫浴15分鐘。短暫離心后 冷卻至室溫。

4.   向離心管中加入350 μL異丙醇和15 μL MB Mix，渦旋振蕩5~10分鐘。按【純化步驟】繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)操作。

C.   干拭子/棉簽樣本

1.   轉(zhuǎn)移采集完細(xì)胞的干拭子（或棉簽）至2 mL離心管中，加入25 μLPK Soln。

2.   加入400 μL Buffer ATL，高速渦旋10秒，于58℃振蕩溫浴30分鐘。

3.   加入400 μL Buffer AL，渦旋混勻，于70℃振蕩溫浴10分鐘，10,000×g離心1分鐘后，吸取600 μL上清液轉(zhuǎn)移至新的2 mL離心管中。

4.   向離心管中加入350 μL異丙醇和15 μL MB Mix，渦旋振蕩5~10分鐘。按【純化步驟】繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)操作。

D.   干血斑（DBS）

1.   轉(zhuǎn)移3~10片3×3 mm尺寸的干血斑（或1~4片6×6 mm尺寸的干血斑）至2 mL離心管中，加入25 μL PK Soln。

2.   加入400 μL Buffer ATL，高速渦旋10秒，于58℃振蕩溫浴30~60分鐘。

注：劇烈振蕩對(duì)干血斑樣本中DNA釋放是有利的，建議在1,500 rpm下進(jìn)行操作，陳舊血卡、動(dòng)物血卡、過(guò)量血卡可適當(dāng)延長(zhǎng)裂解時(shí)間。

3.   加入400 μL Buffer AL，渦旋混勻，于70℃振蕩溫浴10~15分鐘。10,000×g離心1分鐘后，吸取600 μL上清液轉(zhuǎn)移至新的2 mL離心管中。

4.   向離心管中加入350 μL異丙醇和15 μL MB Mix，渦旋振蕩5~10分鐘。按【純化步驟】繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)操作。

E.    動(dòng)物組織

1.   轉(zhuǎn)移小于30 mg動(dòng)物組織至2 mL離心管中，加入25 μL PK Soln。

2.   加入300μL Buffer ATL，高速渦旋10秒。58℃振蕩溫浴30~60分鐘或延長(zhǎng)時(shí)間至完全消化樣本。（如果需要去除RNA，加入2~4 μL RNaseA（100 mg/mL）室溫放置10分鐘以降解RNA）。

注1：對(duì)于不易消化的組織樣本，可延長(zhǎng)消化時(shí)間至消化完全；若存在長(zhǎng)時(shí)間未能消化完全的物質(zhì)，可10,000×g離心1分鐘，然后轉(zhuǎn)移上清液至新的2 mL離心管中。

注2：對(duì)于骨頭和牙齒，需要先液氮研磨成粉末，取100 mg粉末進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，需延長(zhǎng)消化時(shí)間。

3.   加入300μL Buffer AL，渦旋10秒混合均勻。

注：對(duì)于不易裂解的組織樣本且希望獲得更好的DNA質(zhì)量，需繼續(xù)在70℃下裂解10分鐘；對(duì)于組織量少且較易裂解的組織樣本，無(wú)需該70℃裂解步驟。

4.   向離心管中加入350 μL異丙醇和15 μL MB Mix，渦旋振蕩5~10分鐘。按【純化步驟】繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)操作。

F.   培養(yǎng)細(xì)胞

1.   取一定量的細(xì)胞樣本（<5×106 cells）置于2 mL離心管中，1,000×g離心5分鐘收集細(xì)胞，小心棄去上清液。

2.   加入25 μL PK Soln和300μL PBS緩沖液，渦旋打散細(xì)胞。

3.   加入300μL Buffer AL，渦旋10秒，于70℃振蕩溫浴15分鐘。短暫離心后，冷卻至室溫。

4.   向離心管中加入350 μL異丙醇和15 μL MB Mix，渦旋振蕩5~10分鐘。按【純化步驟】繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)操作。

G.    FFPE

1.   將2~8張石蠟切片（厚度5~10 μm）轉(zhuǎn)入2 mL離心管中，用二甲苯或代替物脫除石蠟，然后用無(wú)水乙醇清洗干凈，烘干。

2.   加入25 μL PK Soln和300μL Buffer ATL，高速渦旋10秒，于58℃振蕩溫浴30~60分鐘或至樣本完全裂解。

3.   將離心管置于90℃下溫浴60分鐘（此步驟無(wú)需振蕩）。短暫離心后冷卻至室溫。

4.   向離心管中加入300μL Buffer AL、350 μL異丙醇和15 μL MB Mix，渦旋振蕩5~10分鐘。按【純化步驟】繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)操作。

H.    指甲、頭發(fā)和羽毛

1.   轉(zhuǎn)移10~25 mg指甲、頭發(fā)或羽毛樣本至2 mL離心管中。

注：指甲樣本盡量剪成小片；頭發(fā)樣本從發(fā)根部剪下0.5~1 cm數(shù)根；羽毛樣本剪下1~5 cm長(zhǎng)并剪短；精斑樣本?。?.5 cm2；精液樣本吸取100 μL。

2.   加入25 μL PK Soln、20 μL 1M DTT和300μL Buffer ATL，高速渦旋10秒后，于58℃振蕩溫浴30~60分鐘或延長(zhǎng)時(shí)間至完全消化樣本。

注：對(duì)于毛發(fā)樣本，通常1小時(shí)即可達(dá)到基本消化；對(duì)于指甲樣本，無(wú)需等待指甲完全消化，通常1~6小時(shí)后即可吸取消化液進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)；精斑&精液樣本至少消化1小時(shí)。

3.   加入300μL Buffer AL，渦旋10秒。

4.   向離心管中加入350 μL異丙醇和15 μL MB Mix ，渦旋振蕩5~10分鐘。按【純化步驟】繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)操作。

I.    革蘭氏陰性菌

1.   取一定量的細(xì)菌培養(yǎng)液1~5 mL（<2×109 cells）10,000×g離心1分鐘，小心棄去上清液。

2.   加入25 μL PK Soln和300μL Buffer ATL至上述離心管。渦旋10秒后，于58℃振蕩溫浴30分鐘。

3.   加入300 μL Buffer AL，渦旋10秒。

注：對(duì)于大量細(xì)菌，可繼續(xù)在70℃下裂解10分鐘；對(duì)于少量細(xì)菌，則無(wú)需該70℃裂解步驟。

4.   向離心管中加入350 μL異丙醇和15 μL MB Mix，渦旋振蕩5~10分鐘。按【純化步驟】繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)操作。

三．純化步驟:手動(dòng)法

5.   短暫離心，將離心管內(nèi)液體收集至底部，然后將離心管置于磁力架上靜置30秒。

待磁珠完全吸附后，用移液器吸棄管內(nèi)液體。

6.   向離心管中加入700 μL Buffer DW1，1,000 rpm渦旋振蕩2~3分鐘，磁性分離，吸棄上清液。

注：如對(duì)核酸產(chǎn)物純度要求較高，該步清洗方案可變更為使用500 μL Buffer DW1清洗2次，可獲得更優(yōu)的A260/280和A260/230數(shù)值。

7.   向離心管中加入700 μL Buffer DW2（已用乙醇稀釋），1,000 rpm渦旋振蕩2~3分鐘，磁性分離，吸棄上清液。

8.   重復(fù)上述步驟7一次。

9.   將離心管繼續(xù)保持在磁力架上，放入45~50℃烘箱中，干燥約10分鐘至無(wú)明顯乙醇?xì)馕叮ㄒ部墒覝亓栏?，但需要更長(zhǎng)時(shí)間）。

10.  揮發(fā)除醇結(jié)束后，向離心管中加入50~100 μL Buffer EB，吹散或振散磁珠，58℃振蕩溫浴5~10分鐘。磁性分離，將洗脫液轉(zhuǎn)移至另一干凈離心管中，得DNA產(chǎn)物，保存于-20℃。

四．純化步驟: 96位核酸提取儀

1.    將Sample Plate中加入350 μL異丙醇和15 μL MB Mix（可預(yù)先混合）；

2.    在Sample Plate中加入相應(yīng)體積的不同樣本的裂解上清液；

3.    將96位磁棒套放入到Wash 3 Plate中（必須準(zhǔn)確放入，否則可能損壞磁棒套。此步驟為針對(duì)King Fisher Flex，若使用其它品牌儀器請(qǐng)做相應(yīng)調(diào)整）。

4.    將試劑板按對(duì)應(yīng)順序放入核酸提取儀中，運(yùn)行程序。

5.    程序運(yùn)行完畢，轉(zhuǎn)移Elute Plate中DNA至新離心管中，提取過(guò)程結(jié)束。

注：長(zhǎng)時(shí)間保存建議將DNA產(chǎn)物保存于-20℃環(huán)境。

說(shuō)明書(shū)：

 MAG-MS-GDNA-50，MAG-MS-GDNA-250